ערכה חדשה לגילוי חומצות גרעין של וירוס קורונה (SARS-Cov-2).
New Cאורוnavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Fluבֶּצֶרscent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Product name 】ערכת זיהוי חומצות גרעין חדשה של וירוס קורונה (SARS-Cov-2) (שיטת בדיקה פלואורסצנטית RT-PCR)
【Packaging specifications 】25 מבחנים/ערכה
【Intended usגִיל】
ערכה זו משמשת לזיהוי איכותי של חומצת גרעין מנגיף קורונה חדש בספוגיות אף-לוע, ספוגיות פה-לוע (גרון), ספוגיות אף קדמיות, ספוגיות אמצע-טורבינה, שטיפות אף ושאיפות אף מאנשים החשודים ב-COVID19 על ידי ספק שירותי הבריאות שלהם. זיהוי הגנים ORF1ab ו-N של נגיף הקורונה החדש יכול לשמש לאבחון עזר וניטור אפידמיולוגי של זיהום חדש בקורונה.
【Principles of the procedure 】
ערכה זו מיועדת לבדיקות ספציפיות של TaqMan ולפריימרים ספציפיים המיועדים לרצפי הגנים החדשים של נגיף הקורונה (SARS-Cov-2) ORF1ab ו-N. תמיסת ריאקציית PCR מכילה 3 סטים של פריימרים ובדיקות ניאון ספציפיות לזיהוי ספציפי של מטרות, ומערכת נוספת של פריימרים ובדיקות פלורסנט ספציפיות משמשת כבקרת התקן הפנימי של הערכה לאיתור גנים אנדוגניים לניהול בית.
עקרון הבדיקה הוא שהגשושית הפלורסנטית הספציפית מתעכלת ומתפוררת על ידי פעילות האקסונוקלאז של האנזים Taq בתגובת ה-PCR, כך שקבוצת הפלורסנט הכתב וקבוצת הפלורסנט המרוווה מופרדות, כך שמערכת ניטור הקרינה יכולה לקבל פלואורסצנט. אות, ולאחר מכן באמצעות אפקט ההעשרה של הגברה PCR, אות הקרינה של הבדיקה מגיע לערך סף מוגדר-Ct (סף מחזור). במקרה של אין אמפליקון מטרה, קבוצת הכתבים של הגשושית קרובה לקבוצת המרווה. בשלב זה, מתרחשת העברת אנרגיית התהודה הקרינה, והקרינה של קבוצת הכתבים נכבית על ידי קבוצת ההמרה, כך שלא ניתן לזהות את האות הפלורסצנטי על ידי מכשיר ה-PCR הפלואורסצנטי.
על מנת לנטר את השימוש בריאגנטים במהלך הבדיקה, הערכה מצוידת בבקרות חיוביות ושליליות: הבקרה החיובית מכילה את הפלסמיד הרקומביננטי של אתר המטרה, והבקרה השלילית היא מים מזוקקים, המשמשים לניטור זיהום הסביבה. מומלץ להגדיר בקרה חיובית ובקרה שלילית בו זמנית בעת הבדיקה.
【Main comפונןts 】
| Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | קומפוןתוצאות | |
| נאםe | מפרטיפיקציה | Quantity | Quantity | |
| שליטה חיובית | 180 μL/בקבוקון | 1 | 1 | פלסמידים שנבנו באופן מלאכותי, מים מזוקקים |
| שליטה שלילית | 180 μL/בקבוקון | 1 | 1 | מים מזוקקים |
| SARS-Cov-2 מיקס | 358.5 μL/בקבוקון | 1 | / | זוגות פריימרים ספציפיים, בדיקות פלורסנט לזיהוי ספציפי, dNTPs, , MgCl2, KCl, Tris-Hcl, מים מזוקקים וכו' |
| מיקס אנזים | 16.5 μL/בקבוקון | 1 | / | אנזימי Taq, Transcriptase הפוכה, אנזימים UNG וכו'. |
| מיקס SARS-Cov-2 (ליופיליזציה) | 25 בדיקות/בקבוקון | / | 1 | זוגות פריימרים ספציפיים, בדיקות פלואורסצנטיות לזיהוי ספציפי, dNTPs, אנזימים Taq, transcriptase הפוכה, מים מזוקקים וכו'. |
| 2x מאגר | 375 μL/בקבוקון | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, מים מזוקקים וכו'. |
פֶּתֶק:(1) לא ניתן לערבב או להחליף את הרכיבים בערכות אצווה שונות.
(2) הכן ריאגנט משלך: ערכת מיצוי חומצות גרעין.
【Storage condאיתיons ו expiration date 】
For BST-SARS-25:הובלה ואחסנה ב-20±5℃ למשך זמן רב.
For BST-SARS-DR-25:הובלה בטמפרטורת החדר. אחסן ב-20±5℃ למשך זמן רב.
הימנע ממחזורי הקפאה-הפשרה חוזרים. תקופת התוקף נקבעת באופן טנטטיבי ל-12 חודשים.
עיין בתווית לתאריך הייצור והשימוש.
לאחר הפתיחה הראשונה, ניתן לאחסן את המגיב ב-20±5 מעלות צלזיוס למשך לא יותר מחודש אחד או עד סוף תקופת המגיב, לפי התאריך שיבוא ראשון, כדי למנוע מחזורי הקפאה-הפשרה חוזרים ונשנים, ומספר הקפאת המגיב. -מחזורי הפשרה לא יעלו על 6 פעמים.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1. סוג מדגם ישים: תמיסת חומצת גרעין מופקת.
2. אחסון והובלה של דגימות: אחסן ב-20±5℃ למשך 6 חודשים. להקפיא ולהפשיר את הדגימות לא יותר מ-6 פעמים.
【Tהערכהing metמַגָשׁ בָּנַאִים】
1.Nucleic acid extraction
בחר ערכת מיצוי חומצת גרעין מתאימה לחילוץ חומצת גרעין ויראלית, ופעל לפי הוראות הערכה המתאימות. מומלץ להשתמש בערכת מיצוי וטיהור חומצות גרעין המיוצרת על ידי Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd או ערכה מקבילה לטיהור חומצות גרעין.
2. Reaction ריאג'nt preparation
2.1 For BST-SARS-25:
(1) הסר את SARS-Cov-2 Mix ו-Enzyme Mix, המיס לחלוטין בטמפרטורת החדר לערבב היטב על ידי מכשיר Vortex ולאחר מכן צנטריפוגה קצרות.
(2) 16.5uL תערובת אנזים נוספה ל-358.5uL SARS-Cov-2 Mix וערבבה היטב לקבלת תמיסת התגובה המעורבת.
(3) הכן צינור אוקטלי PCR נקי של 0.2 מ"ל וסמן אותו ב-15uL מתמיסת התגובה המעורבת לעיל לכל באר.
(4) הוסף 15 μL של תמיסת חומצת גרעין מטוהרת, הבקרה החיובית והבקרה השלילית, וכסה בזהירות את מכסה הצינור האוקטלי.
(5) מערבבים היטב על ידי היפוך הפוך, וצנטריפוגה במהירות כדי לרכז את הנוזל בתחתית הצינור.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
(1) הוסף 375ul 2x Buffer ל-SARS-Cov-2 Mix((ליופיליזציה) להכנת תערובת התגובה. ערבב היטב על ידי פיפטינג ולאחר מכן צנטריפוגה קצרות. （לאחר הכנת תערובת התגובה, מומלץ לאחסן ב-20℃ אחסון לטווח ארוך.）
(2) הכן צינור אוקטלי PCR נקי של 0.2 מ"ל וסמן אותו ב-15μL של תערובת תגובה לכל באר.
(3) הוסף 15μL של תמיסת חומצת גרעין מטוהרת, הבקרה החיובית והבקרה השלילית, וכסה בזהירות את מכסה הצינור האוקטלי.
(4) מערבבים היטב על ידי היפוך הפוך, וצנטריפוגה במהירות כדי לרכז את הנוזל בתחתית הצינור.
3. PCR amplification （אנא עיין במדריך המכשיר להגדרות התפעול.）
3. 1 הנח את צינור ה-PCR 8 לתוך תא הדגימה של מכשיר ה-PCR הניאון, והגדר את הדגימה לבדיקה, את הבקרה החיובית ואת הבקרה השלילית לפי סדר הטעינה.
3.2 ערוץ זיהוי פלואורסצנטי:
(1) הגן ORF1ab בוחר את ערוץ הזיהוי של FAM (כתב: FAM, Quencher: None).
(2) גן N בוחר את ערוץ הגילוי של VIC (כתב: VIC, Quencher: None).
(3) גן תקן פנימי בוחר את ערוץ הגילוי של CY5 (כתב: CY5, Quencher: None).
(4) ה-Passive Reference מוגדר ל-ROX.
3.3 הגדרת פרמטר של תוכנית PCR:
| שָׁלָב | טמפרטורה (℃) | זְמַן | מספר מחזורים | |
| 1 | תגובת שעתוק הפוכה | 50 | 15 דקות | 1 |
| 2 | הפעלת אנזים Taq | 95 | 2.5 דקות | 1 |
| 3 | הפעלת אנזים Taq | 93 | 10 שניות | 43 |
| הארכת חישול ורכישת פלואורסצנטיות | 55 | 30 שניות | ||
לאחר ההגדרה, שמור את הקובץ והפעל את תוכנית התגובה..
4.Results analysis
לאחר סיום התוכנית, התוצאות נשמרות אוטומטית, ועקומת ההגברה מנותחת. עקומת ההגברה מוגדרת לסף ברירת המחדל של המכשיר.
【Explanation of test resuזה אומר 】
1. קבע את תקפות הניסוי: ערוץ הביקורת החיובית FAM, VIC צריכה להיות בעלת עקומת הגברה טיפוסית, וערך ה-Ct הוא בדרך כלל פחות מ-34, אך עשוי להשתנות עקב הגדרות סף שונות של מכשירים שונים. ערוץ הבקרה השלילי FAM, VIC צריך להיות Ct לא מוגבר. מוסכם כי יש לעמוד בדרישות הנ"ל במקביל, אחרת מבחן זה אינו תקף.
2. שיפוט תוצאה
| ערוץ FAM/VIC | תוצאת פסק הדין |
| Ct＜37 | בדיקה לדוגמה חיובית |
| 37≤Ct＜40 | עקומת ההגברה היא בצורת S, ויש לבחון מחדש דגימות חשודות; אם תוצאות הבדיקה החוזרת עקביות, היא נחשבת כחיובית, אחרת היא שלילית |
| Ct≥40 או ללא הגברה | בדיקת המדגם שלילית (או מתחת לגבול התחתון של זיהוי ערכה) |
הערה: (1) אם גם ערוץ FAM וגם ערוץ VIC חיוביים בו-זמנית, ה-SARS-Cov-2 נקבע כחיובי.
(2) אם ערוץ FAM או ערוץ VIC חיובי והערוץ השני שלילי, יש לחזור על הבדיקה. אם הוא חיובי בו-זמנית, הוא ייבחן כ-SARS-Cov-2 חיובי, אחרת הוא ייבחן כשלילי של SARS-Cov-2.
מוצרים קשורים
-
ערכת איתור נוגדנים מסוג IgM/IgG COVID-19
ערכת איתור נוגדנים IgM/IgG ל-COVID-19 (שיטת אימונוכרומטוגרפיה זהב קולואידי) מדריך למוצר 【שם המוצר】 ערכת איתור נוגדנים מסוג IgM/IgG （שיטת אימונוכרומטוגרפיה זהב קולואידי) 【מפרטי אריזה【מבדקים】Kit/1, בדיקות תקציר】 נגיף הקורונה החדש שייך לסוג β. COVID-19 היא מחלה זיהומית חריפה בדרכי הנשימה. אנשים רגישים בדרך כלל. נכון לעכשיו, החולים שנדבקו בנגיף הקורונה החדש הם המקור העיקרי...
-
ערכת מיצוי או טיהור של חומצות גרעין
ערכת מיצוי או טיהור של חומצת גרעין או מאוחסנת ב-20℃. הדגימה צריכה להיות מועברת באמצעות סלסול 0℃. הקדמה ערכת המיצוי או הטיהור של חומצות גרעין (שיטת חרוזים מגנטיים) מיועדת לטיהור אוטומטי של RNA ו-DNA מנוזלי גוף (כגון ספוגיות, פלזמה, סרום) באמצעות מכשירים אוטומטיים למיצוי חומצות גרעין. טכנולוגיית החלקיקים המגנטיים מספקת DNA/RNA באיכות גבוהה המתאימה ל...
-
ערכת בדיקת אנטיגן SARS-CoV-2 (אימונוכרומאטוגר...
ערכת בדיקת אנטיגן SARS-CoV-2 (שיטת אימוכרומטוגרפיה) מדריך למוצר 【שם המוצר】 ערכת בדיקת אנטיגן SARS-CoV-2 （שיטת אימוכרומטוגרפיה) 【מפרטי אריזה】 1 בדיקה/ערכה 【אבסטרקט】 שייכים לגנוסי הקורונה החדשים. COVID-19 היא מחלה זיהומית חריפה בדרכי הנשימה. אנשים רגישים בדרך כלל. נכון לעכשיו, החולים שנדבקו בנגיף הקורונה החדש הם הגורמים העיקריים...
-
ערכת בדיקת אנטיגן SARS-CoV-2
ערכת בדיקת אנטיגן SARS-CoV-2 (שיטת אימונוכרומטוגרפיה) מדריך למוצר 【שם המוצר】 ערכת בדיקת אנטיגן SARS-CoV-2 （שיטת אימוכרומטוגרפיה) 【מפרטי אריזה】 1 בדיקה/ערכה ,25 בדיקות/ערכה【Kit/1 CT, נגיפים חדשים שייכים לסוג β. COVID-19 היא מחלה זיהומית חריפה בדרכי הנשימה. אנשים רגישים בדרך כלל. נכון לעכשיו, החולים שנדבקו בנגיף הקורונה החדש הם המקור העיקרי לזיהום; אנשים נגועים אסימפטומטיים...